Ao longo do Douro estão localizadas várias importantes cidades da região. O Porto a capital do Norte de Portugal, e Vila Nova de Gaia. Rio acima encontramos Entre-os-Rios e Caldas de Aregos conhecida pelas suas termas, Peso da Régua considerada a capital do Douro Vinhateiro, e as importantes cidades de Vila Real e Lamego.

Já em plena região demarcada está situada a bonita vila do Pinhão no coração do Douro, e pequenas povoações como Tua, Pocinho (estação terminal dos comboios na linha do Douro) e Barca d’Alva no final da via navegável do Douro, junto à fronteira com Espanha.

No Douro Internacional, onde o rio faz fronteira entre Portugal e Espanha encontra-se Freixo de Espada à Cinta e Miranda do Douro.